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84農業網 時間：2018-03-15 作者：佚名 來源：網絡整理
兔出血癥（Rabbithemorrhagicdisease，RHD）俗稱兔瘟、兔出血熱，是由兔出血癥病毒（KabbitAcmorrhagicdiseasevirus，RHDV）引起的一種急性、高度傳染性、高致死性的疾病。以呼吸系統出血，實質器官水腫、淤血及出血變化為特征。1984年2月，該病首先在我國爆發，隨后朝鮮、韓國、意大利、德國、印度、法國、前蘇聯、西班牙、日本、美國和非洲等國家和地區相繼有該病流行的報道.國內外學者從形態學、生物化學和分子生物學對該病毒進行了系統的研究。但在對BHDV基因組核酸性質的研究上，曾經發生長期的爭論。國際病毒分類委員會（ICTV）2000年最新的報告中將RHDV列入新成立的杯狀病毒科兔病毒屬。兔出血癥（RHD）在流行過程中有一個很特殊的現象，即該病主要侵害成年兔，幼兔反而不易感。從早年的流行病學資料看。3月齡以上成年兔發病率和致死率為90%～100%，2～3月齡家兔為80%左右，1～2月齡家兔為50%左右，1月齡以內幼兔很少發病。該病不僅僅對養兔業造成巨大的經濟損失，而且嚴重威脅瀕臨滅絕的野兔品種。
1RHDV的形態特征和基因組結構
RHDV病毒粒子呈球型，直徑32～36nm，為20面體對稱，無囊膜；病毒粒子的衣殼由32個高5～6nm的圓柱狀的殼粒構成，核心直徑為17～23nm。采用低溫電鏡技術可觀察到180個衣殼蛋白形成位于2次軸上的90個殼粒，構成T=3的20面體結構，直徑為43nm。32個表面空洞位于5次軸和3次軸上，深度和寬度分別為6nm和8nm。90個弧狀殼粒可以分為A和B兩類。在A和B顆粒之間，可以清楚地看到有一密度條帶將兩者連接起來。
2RHDV的理化特性
RHDV在氯化銫中的浮密度為1.29～1.34g/平方厘米，沉降系數為85～162s。對乙醚、氯仿和pH3有抵抗力，能耐受50℃1小時的處理。RHDV能凝集人類的各型紅細胞。王克領等研究發現，RHDV對O型、B型和AB型紅細胞的凝集反應快而強烈，HA效價很高（5×2E13～5×2E15）；而對A型紅細胞的凝集反應慢而弱，HA效價很低（5×2E1）。RHDV也能凝集綿羊、雞、鵝的紅細胞，但凝集能力較弱；不凝集其他動物的紅細胞。N.RuvoenClouet等1995年報道：RHDV本能凝集臍帶和胎兒血紅細胞，認為RHDV由位于人類紅細胞表面的糖脂攜帶，而臍帶和胎兒血紅細胞表面無此物質，同時認為具有弱凝集性（羊等）的紅細胞表面有類似的糖脂物質。
現有結果表明，世界范圍內的所有病毒分離株似乎均為同一血清型，借助于現有的實驗手段尚不能將采自不同地區的分離株區分開。Beminger等比較了采自意大利、韓國、墨西哥和西班牙分離株的血清型，發現僅存在微小的差異。
3RHDV的檢測
兔出血癥大多數為最急性和亞急性，發病后精神沉郁，呼吸團難，很快死亡。剖檢可見死兔營養狀況良好，但出現全身血液循環障礙，實質器官充血、出血。根據這些特點可以初診，確診需經實驗室檢查。
在病死兔的肝組織中含病毒量較多，實驗室常用肝組織勻漿粗提物作為檢測的基本材料。現已建立的實驗室檢測方法有：（1）血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗。該法利用了RHDV能凝集人類紅細胞的特性，是一種常用和比較方便的方法，但有時會產生假陽性或假陰性而且無法檢測到枝蛋白水解酶降解后的病毒顆粒。（2）間接血凝試驗（IHA）。楊漢春用純化病毒，以戊二醛醛化綿羊紅細胞為載體，建立了間接血凝試驗，用以檢測抗體效價。其敏感性比HI高32倍。（3）瓊脂擴散試驗（AGP）。矯正德等用病死兔肝臟乳劑制備的凍融抗原對感染病毒的兔血清進行試驗，檢測出了沉淀抗體。（4）酶標抗體技術。王啟明等采用雙抗體夾心法ELISA試驗快速診斷本病，潘榮生等應用雙抗體夾心法檢測出凍兔肉產品中的RHDV，孫智鋒等用單克隆抗體夾心酶聯免疫吸附試驗檢測出未經濃縮的肌肉樣品中的RHDV。（5）反轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）。Gattre等以5’末喘衣殼蛋白基因為對象設計了RT-PCR和套式RT-PCR，結果說明本法比ELISA敏感104倍，可以檢出少至12個拷貝的病毒核酸。張英等用PCR技術也從病料中擴增和檢測出RHDV。
另外GeimettiD等以地高辛配基標記的RNA為探針通過原位雜交來檢測RHDV，發現注射RHDV8小時后便可在兔的肝臟檢測到病毒，而在脾臟無BNA的復制，病毒在肝臟復制后運送至脾臟，在脾臟有成熟病毒粒子池，用此方法檢測RHDV比免疫組化法敏感性高。余銳萍等用乙型肝炎表面抗原地衣紅染色法檢測出RHDV，宋英今等用金銀染色三抗體夾心法檢測出兔出血癥病毒。
4RHDV的疫苗
由于兔出血癥病毒在體外組織細胞的培養方法尚未建立，目前廣泛使用的疫苗為組織滅活苗。但隨著家兔飼養成本的提高以及非免疫兔的減少，可用于制苗的肝組織日趨減少，使組織滅活苗的成本不斷增加，加之組織滅活苗可能導致散毒的缺點，近年來人們對RHDV疫苗的研究便主要著眼于基因工程疫苗。
BogaJ等將VP60的編碼序列插入酵母表達系統的5’與3’端的調空區之間，使之表達VP60類似蛋白（VLP），該蛋白能夠對兔產生保護作用。FischerL等將RHDV的VP60基因重組入金絲鵲病毒（僅僅在鳥類中復制）的基因組中，使之表達重組蛋白VCP309，該蛋白對實驗感染的兔有保護作用。2000年Fernandez等用李樹痘病毒為載體成功表達了VP60的結構蛋白，并用表達VP60的李樹痘病毒感染植物的抽提物免疫家兔，效果顯著。
另外，最近研究的熱點之一是構建重組病毒免疫兔，使其同時具有對多種病毒性疾病的免疫力。BarcenaJ等用減毒的粘液瘤病毒（MV）構建了能表達VP60的重組病毒，表達出的VP60上還帶有可轉移的胃腸炎病毒（TGEV）的抗原決定簇。用該重組病毒通過皮下注射或口服途徑感染兔，可使之同時產生針對MV和RHDV的抗體；另外由于該重組病毒含有TGEV的抗原決定簇，表現出一定的水平轉移能力。Torres等對該重組病毒作為疫苗使用的安全性，在實驗室條件下進行了評估，發現即便用100倍的試驗劑量依然是安全的，未引起家兔的免疫耐受，對孕兔也未造成傷害。另外，還在野外一定限制區域內對該疫苗的水平傳播能力進行了測試，發現有50%未接種該病毒的兔得到免疫保護。從而為在野兔中大規模預防MV與RHDV提供了有效途徑。
RHDV作為一種新出現的傳染病且危害巨大，由于還不能在體外長期傳代培養，一定程度上阻礙了對此病的進一步研究，一些性質還不清楚。由于RHDV只感染兔和它的高度毒力，可以考慮應用該病毒作為一些基因工程疫苗的載體。一些國家準備將其作為控制野兔數量的生物手段，鑒于歷史教訓及環境保護的要求，應該慎之又慎。由于動物出血性疾病對研究由病毒引起的人類出血性疾病可以起模型作用，因此近年來對兔出血癥的研究趨于升溫。
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