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鋸緣青蟹黃水病病原研究及綜合防控初報

84農業網   時間:2018-03-14    作者:佚名    來源:網絡整理

鋸緣青蟹簡稱青蟹,是我國浙江、福建和廣東等東南沿海省份的主要養殖品種,因其肉質鮮美,營養豐富,經濟價值高而得到持續快速發展,產值達幾十億元。"黃水病"(亦稱白水病、白漿病)是目前青蟹養殖發展中的主要疾病之一,其發病范圍廣、死亡率高,給養殖青蟹造成重大經濟損失,嚴重制約了青蟹養殖的健康發展。該病主要表現為病蟹蟹體消瘦,肌肉白濁,打開蟹蓋可見到不同程度的土黃色或濁白色牛奶狀液體等癥狀。

自該病發生以來,不少研究者對其發病原因進行研究,但結果各不相同,其病原至今仍有較大的爭議,紀榮興等1998報道非液化摩拉氏菌是"黃水病"的病原,毛之娟等2001曾報道辛辛那提弧菌等是"黃水病"的病原,宋振榮等1998認為病毒是肌肉壞死"黃水病"的病原,而韓新全等則認為環境因素是誘發"黃水病"的根本原因。筆者通過大量取樣發現,所有"黃水病"病蟹的血淋巴和組織中均可發現大量的寄生原蟲,經過病原、組織病理、電鏡觀察以及分子生物學方法研究,確定血卵渦鞭蟲Hematodinium.sp是引起養殖青蟹"黃水病"的重要病原。現將調查的初步情況報告如下,希望能為該病的診斷和防治提供科學依據。

1、流行情況

該病主要發生在南方沿海養殖鋸緣青蟹當中,在浙江的象山港、三門灣和樂清灣一帶,包括三門、玉環、樂清、寧海、象山等地每年均有不同程度的發生,并往往呈暴發性流行趨勢,流行率通常在30%~50%左右,平均死亡率達20%,病情重的圍塘,死亡率可達60%~70%以上,個別塘甚至出現絕產,給養殖生產帶來極大損失。該病通常病情發展緩慢,從發病到死亡往往持續較長時間,但具有傳染性,發病率和死亡率高。初步研究發現,其流行與季節、溫度、鹽度等環境因子、個體大小及性別等可能存在一定的關系。主要發生在每年的6月份~10月份的夏秋季節,其中以7~9月高水溫期為發病流行高峰,尤其是在溫鹽度環境變化較大的梅雨季節和臺風季節,會在短時間內出現死亡高峰。另外,小個體較大個體成活率高,雄性個體較雌性個體死亡嚴重。鹽度較低的地區如杭州灣沿岸的慈溪、余姚等地尚未見發生。

2、發病癥狀

患"黃水病"病蟹通常攝食下降或停止攝食,行動遲緩,嚴重者往往爬到塘堤或涂面上死亡。病蟹蟹體消瘦,體色暗淡,關節膜處呈黃色或濁白色,部分附肢關節的外殼呈粉紅色,步足關節失去彈性、易脫落。剖開步足或大螯,可見肌肉以感染輕重而出現不同程度的白濁液化;打開蟹蓋,可見肝胰腺模糊呈紅棕色或乳白色,腸胃空,鰓呈土黃色或黑褐色,個別病蟹的鰓并發黑鰓病;甲殼腔內的血液由正常時的藍青色具較強凝聚性轉變為呈淡黃色或濁白色牛奶狀不能凝固的變性液體。

組織病理觀察發現所有"黃水病"病蟹的血淋巴急劇下降,代之以大量的寄生原蟲。病蟹的肝胰臟、心臟、足部肌肉以及鰓等部位亦均充滿上述寄生原蟲,而作為對照組健康青蟹的各器官組織中則未發現有寄生蟲,表明該寄生蟲與青蟹的"黃水病"有密切的關系。病蟹在發病中后期,由于寄生蟲的大量寄生,導致血淋巴數量急劇下降,并表現出濁白色和不能凝聚等癥狀;同時其各重要組織器官均發生嚴重病變,生理功能喪失,進一步導致病蟹死亡。

3、病原形態與分子生物學特性

用1ml注射器先吸取10%海水甲醛固定液0.1ml,再從青蟹圍心腔內抽取等量血淋巴液混勻,將固定的血淋巴滴少許于玻片上,蓋上蓋玻片,于顯微鏡下觀察可見血淋巴急劇下降,代之以大量的寄生原蟲。從不同"黃水病"病蟹的乳白色液體中可以發現不同發育階段的蟲體,多數呈卵圓形,有單核、雙核或多核期,大小約5~10多微米不等,也可見帶2條鞭毛的孢子階段。分離到的不同階段蟲體與Stentiford所描述的其他甲殼類中寄生的血卵渦鞭蟲的營養體、多核原生質體以及帶鞭毛的孢子體形態、結構特征極為相似。

取病蟹血淋巴,采用Hudson等1994的血卵渦鞭蟲Hematodiniurn.sp特異引物進行PCR擴增,擴增產物進行1.5%的瓊脂糖凝膠電泳,結果發現"黃水病"病蟹的血淋巴樣品均能擴增出680bp左右的條帶,而對照的健康蟹血淋巴樣品則沒出現條帶。根據擴增產物的測序結果,可以確定該寄生蟲為一種血卵渦鞭蟲Hemarodiniurn.sp,初步認定其是引起養殖鋸緣青蟹"黃水病"的重要病原。

4、感染途徑

根據Shield(1994)等研究,血卵渦鞭蟲在甲殼類體內寄生階段的生活史大致包括3個階段,即營養體階段、多核原生質階段及無性繁殖階段(孢子生殖),通過孢子生殖會產生孢子母細胞,進一步發育形成兩種大小形態相異的帶鞭毛具有運動性的腰鞭孢子階段(大腰鞭孢子和腰鞭孢子)。成熟的腰鞭孢子通過口部的甲殼開裂處釋放到水體,并能在海水中存活幾天時間。根據1998年Appleton等的離體培養結果,其可能進一步發育成為營養體。

有關血卵渦鞭蟲確切的感染和傳播途徑。Shields等認為在大多數海產甲殼類的寄生腰鞭蟲中,腰鞭孢子很可能是感染期,但目前尚不清楚其是否可能產生休眠孢子或存在其他中間宿主。研究表明人工注射感染病蟹的血淋巴(包括營養體和腰鞭孢子)能成功感染健康蟹類。但Cachon(1987)利用自由游動的腰鞭孢子浸浴健康梭子蟹卻未能感染成功。類似于許多其他甲殼類原生動物,同類相食可能是某些宿主間傳播的有效方式。Sheppard等(2003)通過投喂病蟹的方法,在Calllnectessapidus上獲得投喂感染的成功。另外,深海枝角類等餌料生物也有可能是寄生蟲的中間宿主,因為在這些餌料生物中也檢測到了類血卵渦鞭蟲的存在。Meyers等(1996)發現,血卵渦鞭蟲可能通過性傳播,其存在于一些雄性個體輸精管的精液里,但需要進一步研究證實。

對發病情況的調查結果顯示,該病與養殖環境存在較大關系,圍塘老化、養殖密度高、水交換條件差的池塘容易發病,尤其是在臺風、暴雨等環境突變時導致養殖水體鹽度、pH值、水溫異常變化,青蟹往往由于強烈的應激反應,免疫抗病力下降,導致"黃水病"及并發病的流行。

5防治建議

目前尚無有效的治療藥物。必須堅持"以防為主、綜合治理"的原則予以預防,建議現階段應從病原控制、苗種質量、環境優化以及養殖青蟹抗病力提高等方面著手,采取積極有效的措施,控制疾病的發生和蔓延:

1、做好放養前的清塘、消毒工作:池塘老化、環境污染嚴重,是導致各類病害多發的主要原因,必須做好放養前的清淤消毒工作,以控制和消滅病原,切斷傳播途徑。

2、選擇健康苗種:放養健壯和不帶病原的苗種是養殖生產成功的基礎。必須選擇體質健壯、無傷病、規格較大的種苗,并經檢疫和消毒后才能放養。

3、加強養殖管理、優化養殖環境:控制放養密度、合理投喂餌料、科學管理水質,通過采取物理、化學、生物和生態方法進行養殖環境的調控優化,以控制疾病的發生。

4、減少應激、提高機體抗病力:應激原過于強烈,或持續的時間較長,往往使機體的免疫機能和抵抗力下降從而易受病原體的感染。應盡量減少應激因子,包括環境突變、污染以及人為的各種操作等原因可能對養殖青蟹造成的應激反應;投喂優質飼料、添加免疫激活劑(如多維、免疫多糖、VitC,VitE等),提高機體的免疫力和抗病力。

5、開展配合飼料研究與推廣應用:檢測發現,作為青蟹主要飼料來源的小蝦蟹亦是黃水病病原的攜帶者,鮮活飼料極有可能是疾病的一個感染途徑,同時鮮活餌料的大量投喂也是影響養殖底質、導致水質環境惡化的主要因素,應積極開展人工配合飼料的研制與推廣應用。

6、加強監測,防止病原擴散:黃水病是一種危害較大的流行性疾病,應對該病的發生情況進行監測,一旦發現疾病,應及時采取措施控制病原的傳播與擴散,病蟹及尸體應作消毒深埋或銷毀處理,以免進一步傳染。同時必須注意藥物的濫用。

7、加強疾病傳播途徑及養殖技術研究:一方面進一步摸清疾病的感染途徑,從源頭上控制病原的發生和蔓延;另一方面,要開展健康養殖技術研究,探索適合青蟹產業化發展的高效健康養殖模式,從根本上杜絕該類疾病的發生。

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