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84農業網 時間:2018-03-15 作者:佚名 來源:網絡整理
1發病情況及臨床癥狀
該養鴿戶飼養1.5歲的種鴿620只,10月18日給種鴿肌肉注射雞I系苗1頭份/只,30-40日齡肉鴿200只,但未免疫疫苗。鴿群發病2天,種禽死亡2只,死亡率為0.32%,肉鴿死亡78只,死亡率為39%,使用恩諾沙星進行治療,但效果不明顯。病鴿精神不振,食欲減退,飲水量增加,羽毛松亂無光澤,垂頭縮頸,翅膀松散下垂,口鼻分泌物增多。部分鴿子還出現神經癥狀,如頭頸扭曲,頭向后仰。糞便先由黑色粒狀,后轉為黃綠色稀便。
2剖檢病變
喉頭、氣管分泌物增多,嗦囊內充滿酸臭液體及氣體,腺胃乳頭有出血點,心包周圍、肝表面覆蓋一層黃色膠胨樣物。十二指腸、小腸出血,腸系膜脫落、潰瘍,盲腸扁桃體腫大出血。種鴿卵巢出血。
3實驗室診斷
3.1樣品處理
取脾和肺進行研磨,加人生理鹽水制成20%的乳劑,反復凍融3次,于零下20度保存以備用。
3.2 RT-PCIZ
RT-PCR結果見圖1。
RNA提取與反轉錄(RT)。取制備好的病料懸液,按RNA提取試劑盒說明書進行提取,得到的RNA模板立即用于反轉錄。反轉錄體系為25微升,RNA模板16微升,引物M1 2微升,5xBuffer5微升,dNTP 2微升,RNasin0.5微升,M-MLV0.5微升。置PCR儀中42℃反轉錄1小時,95℃5分鐘,反應結束后直接使用或于零下70度保存。
PCR擴增。取反轉錄產物5.0微升加入到新城疫PCB反應A混合物的PCB管中,混勻,2000轉/分鐘離心10秒,立即進行PCR擴增;同時設陰陽性對照。擴增條件為94度4分鐘,94度30秒,56度50秒,72度50秒,35個循環,72度延伸5分鐘,4度保存。取反應A的反應物0.5微升加入到新城疫PCB反應B混合物的PCR管中,混勻,2000轉/分鐘離心10秒,立即進行PCR擴增;同時設陰陽性對照,擴增條件為94度4分鐘,94度30秒,56度50秒,72度50秒,35個循環,72度延伸5分鐘,4度保存。
瓊脂糖凝膠電泳。取PCR產物5微升,于1%瓊脂糖凝膠中電泳,凝膠牛含有13.5微升/毫升溴化乙錠,電泳緩沖液為0.5xTAE,80伏30分鐘,電泳完后于紫外燈下觀察拍照,有460bp的目的帶出現。
3.3病毒分離鑒定
將3.1處理的樣品,加入“雙抗”(青霉素、鏈霉素)(2000單位/毫升),感作l小時,然后離心取上清液接種10日齡的SPF雞胚2枚,37度孵育,接種后雞胚分別在36小時和40小時死亡,收集尿囊液,做紅細胞凝集試驗(HA),紅細胞出現凝集,HA效價為28和27。
用新城疫陽性血清做血凝抑制試驗(HI),可抑制新城疫病毒對紅細胞的凝集,抑制價是27。
由此證明此鴿群發生的為新城疫病。
4防治
鴿群緊急免疫新城疫Ⅵ系苗,種鴿4羽份/只,肉鴿3羽份/只進行滴鼻。
每天的飲水中加入0.05%的氟苯尼考和3%的葡萄糖供鴿子飲用,連用3天,增強鴿子的抵抗力,防止繼發感染。
保持飼料和飲水的清潔衛生,保證鴿舍的通風干燥,加強鴿舍的保暖措施,徹底清除鴿舍內的糞便及污物,用消毒劑進行消毒。
3天后回訪,除肉鴿緊急免疫后死亡8只外,其余的肉鴿、種鴿病情已得到控制,并恢復正常。
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